（1）試劑：MatrigengeL Matrix、小鼠膽管類器官培養試劑盒、類器官消化液、潤洗液、基礎培養基。

（2）耗材：48孔細胞培養板、離心管（規格為1.5mL）、移液器（規格為10μL、200μL、1000μL和5000μL）、無菌吸頭（規格為10μL、200μL和1000μL）、40μm細胞過濾器。

（1）MatrigengeL Matrix 4℃化凍

（2）小鼠膽管類器官完全培養基的制備：將200μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement C(250x)加至9.76mL Mouse Liver Ductal Organoid Basal Medium中，充分混合，配制成10mL小鼠膽管類器官完全培養基，室溫平衡，可在2-8°C儲存，建議在兩周內使用。

以下操作吹打細胞的吸頭均需用潤洗液潤洗后使用：

（1）小鼠膽管類器官收集：保留原有培養液，用移液管吸頭尖端輕輕刮下吹打細胞外基質和小鼠膽管類器官混合物，轉移至1.5mL離心管中，吹打5~10次，使小鼠膽管類器官和細胞外基質分離，300g離心3分鐘。

（2）小鼠膽管類器官消化：離心后，去除上清液，分別加入200μL類器官消化液，吹打混勻后置于37℃培養箱中消化。

（3）小鼠膽管類器官終止消化：類器官消化時間5分鐘，吹打混勻，加入1mL基礎培養基吹打混勻以終止消化反應，300g離心3分鐘。

（4）細胞過濾：加入1mL基礎培養基重懸細胞沉淀，用40μm細胞篩網過濾細胞懸液，收集濾液至新的離心管中，300g離心3分鐘。

（5）小鼠膽管類器官清洗：離心后用基礎培養基清洗1次收集至同一個離心管中，離心以去除殘留的消化液。

（6）細胞計數：用1mL基礎培養基重懸細胞，取18μL細胞懸液與2μL臺盼藍混勻，取10μL混合液加至血球計數板中，顯微鏡下觀察計數,300g離心3分鐘，棄上清。

（7）基質膠3D包裹：根據密度加入適量基礎培養基重懸細胞，取5 μL細胞懸液至新的離心管中，每組分別與18μL不同的細胞外基質冰上混勻（注意，混勻吹打的動作要輕柔，切忌產生大量氣泡，常溫混勻則需要控制在15秒內），混勻后置于冰上。

（8）種板培養：用移液器吸取10μL細胞外基質和細胞的混合液移至培養板孔中，混合懸液須點在培養孔底部中央位置，其鋪開后不可接觸培養孔側壁，平行2孔。將培養板放入37℃，在5%二氧化碳細胞培養箱中孵育20分鐘，待細胞外基質凝固至不再流動后，沿孔壁緩緩加入250 μL完全培養基。

（9）持續培養：將細胞培養板放入培養箱中進行培養，每1天于倒置顯微鏡下觀察小鼠膽管類器官的生長狀態，于倒置顯微鏡下拍照，記錄多個視野中類器官的形態和分布。

?；|膠與Brand C基質膠均有良好的培養效果，兩組實驗膽管類器官均無明顯貼壁現象。其中20224105CWD的培養效果略勝一籌。

模基生物基質膠經過嚴格的質檢驗證，具備安全性高、濃度多樣性、批次穩定性好、低內毒素、無污染。在購買?；a品時，根據用戶個性化的需求對用戶進行最佳產品、貨號的推薦，以便用戶獲得性價比最高、效果最優的產品。

1.膽管“類器官”修復受損肝臟試驗成功——首證實驗室培養的細胞可助器官移植（中國科學院官網）

2.Cholangiocyte organoids can repair bile ducts after transplantation in the human liver（science官網）