1.ABW® Matrigengel 高濃度基底膜基質用于哪些實驗？

      ABW® Matrigengel 高濃度基底膜基質可適用于體內應用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使ABW® Matrigengel 基底膜基質注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或以后的切除。

2.如何將ABW® Matrigengel 基底膜基質用于3D培養？怎樣制作3D膠？需要將細胞嵌入到ABW® Matrigengel 基底膜基質中嗎？

       ABW® Matrigengel 高濃度基底膜基質可適用于體內應用研究，如制備厚層包被用于3D細胞培養。細胞可以嵌在ABW® Matrigengel 基底膜基質中或者接種在ABW® Matrigengel 基底膜基質表面（覆蓋法）。

3.使用ABW® Matrigengel 基底膜基質時，需要將移液器吸頭和離心管預冷嗎？

       是的。因為ABW® Matrigengel 基底膜基質在高于10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作基底膜基質時使用預冷的移液管、吸頭和離心管。

4.ABW® Matrigengel 基底膜基質會快速聚合嗎？

       ABW® Matrigengel 基底膜基質在 22℃至 35℃時會快速聚合成膠。

5.什么情況下，需要使用無酚紅ABW® Matrigengel 基底膜基質？

       對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅ABW® Matrigengel 基底膜基質，如使用熒光染料或 Drabkins 法計數內皮細胞成管實驗。對于子宮內膜細胞培養，也需使用無酚紅ABW® Matrigengel 基底膜基質。

       此外，酚紅和非甾體雌激素結構類似，有類雌激素效應。在實驗動物體內可能具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。

6.如何從ABW® Matrigengel 基底膜基質中收獲細胞？

       推薦使用中性蛋白酶或細胞回收解決方案來收獲培養在ABW® Matrigengel 基底膜基質中的細胞。

       中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續接種培養或進行檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會產生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。

        對于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶反應的細胞收獲。因為ABW® Matrigengel 基底膜基質中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設一個ABW® Matrigengel 基底膜基質（不接種細胞）的對照組。

其它從ABW® Matrigengel 基底膜基質中收獲細胞的方法：

        降低溫度至4℃-6℃使ABW® Matrigengel 基底膜基質解聚，需要一定的時間并且僅適合一部分應用。

        離心以破壞ABW® Matrigengel 基底膜基質結構。

7. ABW® Matrigengel 基底膜基質包被過的培養皿可以儲存多長時間呢？

       包被過的培養皿最好當天使用，具體情況取決于實驗目的。需要保存的情況下，可在37°C培養箱中最多存放7天。保存時ABW® Matrigengel 基底膜基質表面需要使用無血清培養基均勻覆蓋，保持濕潤。

8. 哪些情況下應該選用薄膠？什么時候用厚膠呢？ 3D培養有哪些應用？

      薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖。如原代細胞培養，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠；厚膠主要用于3D細胞培養，如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結構（Ring Assay），以及進行細胞侵襲實驗等；3D細胞培養實驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構，如生物組織等。

9. 進行內皮管形成實驗，應該選用多大濃度的 ABW® Matrigengel 基底膜基質呢？

       進行該實驗，ABW® Matrigengel 基底膜基質最低濃度應不低于10mg/mL。

10. 做細胞侵襲實驗，需要使用多少ABW® Matrigengel 基底膜基質進行包被？

       包被24孔通透性支持物，推薦每孔使用0.1 mL (濃度100-200μg/cm2) ，ABW® Matrigengel 基底膜基質貨號為082704。

11. ABW® Matrigengel 基底膜基質的最低成膠濃度是多少？

       不同的實驗目的需要不同的 ABW® Matrigengel 基底膜基質濃度，用戶應該根據具體的實驗需求確定。ABW® Matrigengel 基底膜基質最低成膠濃度為 3 mg/mL。稀釋時不要簡單進行體積倍比稀釋，不同批次間的 ABW® Matrigengel 基底膜基質濃度有差異，應該根據最終工作濃度 (mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血清培養基）的量。用于體內研究的 ABW® Matrigengel 基底膜基質，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應低于 4 mg/mL。

12. ABW® Matrigengel 基底膜基質膠塊在體內可以維持多長時間？

       基質膠膠塊可以在體內維持至少一周的時間。

13. 怎樣稀釋ABW® Matrigengel 基底膜基質?

      使用冰上預冷的無血清培養基或者PH 7.4的PBS。

14. 應該如何對ABW® Matrigengel 基底膜基質移液操作?

       推薦使用預冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時不要觸及瓶子底部；分液時切忌過快、用力過猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時，應該吸取6mL，分液到移液管內仍有1mL時即停止；如果使用自動移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進行分液。

15. 為什么我的ABW® Matrigengel 基底膜基質很粘稠？

       基質膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0 mg/mL，基質膠會顯得非常厚重。ABW® Matrigengel 基底膜基質基質膠產品在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度ABW® Matrigengel 基底膜基質(ABW® Matrigengel 基底膜基質 HC)不稀釋也可以直接使用，如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內后，細胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標準濃度的ABW® Matrigengel 基底膜基質產品使用方法使用，具體稀釋濃度根據實驗需求確定。

       除因為產品本身濃度高而粘稠外，基質膠的狀態還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關。整個運輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏ABW® Matrigengel 基底膜基質的冰箱帶有自動除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質膠成膠。所以，切忌將ABW® Matrigengel 基底膜基質儲藏于此類冰箱中。為保證ABW® Matrigengel 基底膜基質的使用效果，凍融次數應該盡可能減少。拿到新的ABW® Matrigengel 基底膜基質后，請按照單次用量進行分裝。每次融化操作，ABW® Matrigengel 基底膜基質都應該放置于冰上。如果ABW® Matrigengel 基底膜基質在成膠狀態被凍住，再次融化時將不能成恢復液體。

16. ABW® Matrigengel 基底膜基質可以誘導ES/iPS細胞分化嗎？

      可以的，已經有相關文章表明ABW® Matrigengel 基底膜基質可以用于ES/iPS細胞的分化研究。

17. 為什么ABW® Matrigengel 基底膜基質在37°C成膠，而在4°C時卻呈液體狀態？

       ABW® Matrigengel 基底膜基質是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜， 新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原, 巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構成了 ABW® Matrigengel 基底膜基質的基本結構。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價鍵可以結合，促使 ABW® Matrigengel 基底膜基質形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價鍵結合，所以 ABW® Matrigengel 基底膜基質呈現液體狀態。

18. ABW® Matrigengel 基底膜基質可以反復凍融嗎？

      建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝，保存。

19. 為什么細胞沒有貼壁？ABW® Matrigengel 基底膜基質也脫落了？

      首先需要檢查細胞的接種濃度是否過高，ABW® Matrigengel 基底膜基質的用量應等同于細胞培養體系中培養基的用量。如果ABW® Matrigengel 基底膜基質被稀釋到過低的濃度，形成的膠體容易從組織培養器皿表面分離。

20. 未稀釋的ABW® Matrigengel 基底膜基質中出現的沉淀應該怎么樣處理？

      4℃下低速離心，去除沉淀物 。

21. 未使用完的ABW® Matrigengel 基底膜基質應該怎樣保存的？

       與細胞培養基或緩沖液混合過但未使用完的ABW® Matrigengel 基底膜基質，不建議保留再用。

22. ABW® Matrigengel 基底膜基質中含有 DNA和/或RNA嗎?

       是的。ABW® Matrigengel 基底膜基質沒有經過DNA酶或RNA酶消化處理，可能會含有痕量的DNA、RNA。

23. ABW® Matrigengel 基底膜基質中有血管內皮生長因子（VEGF）和金屬蛋白酶（MMPs）嗎?

       在標準濃度的ABW® Matrigengel 基底膜基質中含有 5.0-7.5 ng/mL 的血管內皮生長因子（ VEGF），GFR ABW® Matrigengel 基底膜基質中VEGF含量為1.0-1.5 ng/mL。另外，可能含有老鼠腫瘤細胞來源的痕量金屬蛋白酶（MMPs）。

24. ABW® Matrigengel 基底膜基質中有 LDEV嗎?

      沒有的。ABW® Matrigengel 基底膜基質經免疫方法及PCR方法檢測，并不含有乳酸脫氫酶增高病毒（LDEV）或者乳酸脫氫脢增生病毒（LDHV） 。此外，我們還針對小鼠群體及腫瘤來源篩查了其他種類的病毒。詳細信息請參見產品說明書。

25. ABW® Matrigengel 基底膜基質中有尿素嗎?

       沒有的。在ABW® Matrigengel 基底膜基質生產準備過程中使用過尿素，后續流程中經過透析方法已經去除了。

26. ABW® Matrigengel 基底膜基質中使用的什么緩沖液？

       低葡聚糖 DMEM (1g/L)，其中包含 50 μg/mL 慶大霉素。

27. ABW® Matrigengel 基底膜基質中含有纖維連接蛋白（Fibronectin）嗎？

       是的，通過使用Western Blot檢驗，我們在ABW® Matrigengel 基底膜基質中發現了微量的纖維連接蛋白（Fibronectin）

28. ABW® Matrigengel 基底膜基質中含有玻璃體結合蛋白（ vitronectin）嗎?

      某些EHS組織中可能含有微量的血液，因此ABW® Matrigengel 基底膜基質中可能會有痕量的玻璃體結合蛋白（Vitronectin）。

29. ABW® Matrigengel 基底膜基質 中還有什么別的物質？

       ABW® Matrigengel 基底膜基質中還可能含有濃度小于 0.02%的三氯.甲.烷，以及腫瘤細胞的產生的其他未知蛋白或分子。

30. 提取過程會引起層粘連蛋白變性嗎？

       不會的，不會引起層粘連蛋白變性。

31. ABW® Matrigengel 基底膜基質可以儲存在 -70℃嗎？

       是的。ABW® Matrigengel 基底膜基質可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的ABW® Matrigengel 基底膜基質進行分裝，儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質的小管中，方便保存和使用。

32. ABW® Matrigengel 基底膜基質的折射率是多少？

       20℃ 條件下，ABW® Matrigengel 基底膜基質的折射率是 1.3406 到 1.3407，相對折射率為1.0056（同等條件下，水的折射率為 1.333）。

33. ABW® Matrigengel 基底膜基質會有自發熒光嗎？

      ABW® Matrigengel 基底膜基質是一種蛋白混合物，經過透析處理后溶解在 DMEM 培養基中。為防止微生物污染，培養基中添加了慶大霉素。所以ABW® Matrigengel 基底膜基質可能引發熒光的組分包括其中的蛋白質成分，維生素成分以及慶大霉素（氨基糖苷類抗生素）。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態，建議使用者建立對照實驗，在所需要的波長條件下進行對比，以便排除背景熒光。

34. 使用 ABW® Matrigengel 基底膜基質培養的細胞，如果需要進行切片或者免疫組織化學及免疫熒光檢驗，該怎樣固定呢？如何避免解聚？

        可以使用 2%濃度的多聚.甲.醛進行固定。為避免固定后出現解聚的情況，可以加入 1%濃度的戊.二.醛。戊.二.醛作為固定劑，常用于電鏡觀察。如果用戶需要進行免疫熒光檢驗，加入戊.二.醛后，會出現明顯的背景熒光。為了解決這一問題，我們建議用戶在固定之后，使用 NaBH4 進行淬滅。NaBH4 極易氣泡，進行該步驟時，必須在水平操作臺上小心操作，避免晃動，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊.二.醛進行固定，如 0.1%到 0.5%，濃度越低，背景熒光信號越少。